Plasmide CRISPR d'Activation (h) Akt3: sc-400028-ACT

AKT3 code la kinase sérine/thréonine Akt3, un effecteur dépendant de PI3K qui intègre les signaux des facteurs de croissance et des nutriments afin de réguler la survie cellulaire, le métabolisme, la prolifération et la différenciation. Akt3 participe à la signalisation canonique PI3K–AKT–mTOR et interagit avec des réseaux médiés par FOXO, GSK3 et BAD, qui influencent la résistance à l’apoptose, la synthèse protéique et la progression du cycle cellulaire. Dans les tissus humains, l’activité d’AKT3 est particulièrement importante pour le développement neural et les réponses au stress cellulaire, et une signalisation dérégulée a été associée à une altération du contrôle de la croissance et à un remodelage de voies oncogéniques dans divers contextes pathologiques. Moduler l’expression d’AKT3 est donc utile pour disséquer la dynamique des voies de signalisation, la régulation par rétrocontrôle et les transitions d’état cellulaire liées à des phénotypes prolifératifs et métaboliques.

Akt3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Akt3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Akt3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Akt3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Akt3 dans les cellules tumorales présentant une expression de AKT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.