Akt3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400028-ACT

AKT3 codifica a quinase serina/treonina Akt3, um efetor dependente de PI3K que integra sinais de fatores de crescimento e nutrientes para regular a sobrevivência celular, o metabolismo, a proliferação e a diferenciação. A Akt3 participa da sinalização canônica PI3K–AKT–mTOR e interage com redes mediadas por FOXO, GSK3 e BAD, que moldam a resistência à apoptose, a síntese proteica e a progressão do ciclo celular. Em tecidos humanos, a atividade de AKT3 é particularmente relevante para o desenvolvimento neural e as respostas ao estresse celular, e a sinalização desregulada tem sido associada a alterações no controle do crescimento e ao remodelamento de vias oncogênicas em múltiplos contextos de doença. Assim, modular a expressão de AKT3 é útil para dissecar a dinâmica das vias, a regulação por feedback e transições de estado celular ligadas a fenótipos proliferativos e metabólicos.

Akt3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AKT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Akt3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AKT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AKT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Akt3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AKT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Akt3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Akt3 em células tumorais com expressão de AKT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.