Plásmido Doble Nickase (h) ADSL: sc-404936-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ADSL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ADSL (h) y el plásmido de doble nickasa ADSL (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ADSL. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ADSL Anticuerpo (C-11): sc-365623
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ADSL | sc-404936-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ADSL | sc-404936-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La liasa de adenilosuccinato (ADSL) es una enzima bifuncional de la biosíntesis de novo de purinas que cataliza la conversión de adenilosuccinato en AMP y de SAICAR en AICAR, vinculando el metabolismo de nucleótidos con el equilibrio energético celular y la capacidad proliferativa. Al regular las reservas de nucleótidos de purina y los intermediarios de la vía, la actividad de ADSL influye en la síntesis de ADN/ARN, las respuestas al estrés de replicación y la señalización metabólica en células de rápida división. Las variantes de pérdida de función en la ADSL humana alteran la homeostasis de purinas y se asocian con la deficiencia de liasa de adenilosuccinato, un trastorno neurometabólico caracterizado por la acumulación de succinilpurinas y un neurodesarrollo deteriorado. En investigación, ADSL se estudia para desentrañar la dinámica del purinosoma, el control metabólico de la expresión génica y la contribución de las alteraciones de la vía de purinas a fenotipos de estrés celular.
ADSL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADSL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADSL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADSL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADSL alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.