Plasmide Double Nickase (h) Adducin β: sc-402277-NIC

ADD2 code l’adducine β, une protéine du cytosquelette membranaire qui forme des hétérotétramères avec l’adducine α/γ afin de coiffer et de regrouper les filaments d’actine, et de favoriser l’assemblage du réseau spectrine–actine au niveau du cytosquelette cortical. En régulant le remodelage de l’actine et la stabilité membranaire, l’adducine β contribue au contrôle de la forme cellulaire, à la dynamique d’adhérence et à la résistance mécanique, des processus souvent coordonnés par la signalisation des GTPases de la famille Rho et par une modulation de l’activité de l’adducine dépendante de la phosphorylation. Dans les cellules érythroïdes et d’autres tissus soumis à des contraintes mécaniques, une fonction adéquate de l’adducine soutient l’intégrité du cytosquelette et l’organisation de la membrane. Des perturbations génétiques et fonctionnelles des complexes d’adducine ont été étudiées dans des troubles de la fragilité membranaire et de la mécanique cellulaire altérée, notamment des défauts du cytosquelette des globules rouges, ainsi que dans des contextes plus larges où le remodelage du cytosquelette est dérégulé.

Adducin β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.