ADAMTS-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430369-ACT

Adamts9 codifica a ADAMTS-9, uma metaloprotease secretada da família ADAMTS que remodela a matriz extracelular ao processar proteoglicanos e substratos relacionados. Em tecidos de camundongo, a ADAMTS-9 contribui para a renovação da matriz pericelular, a migração celular e programas morfogenéticos que moldam o desenvolvimento de órgãos e a homeostase tecidual. Sua atividade se cruza com vias que regulam a organização da matriz, a biologia da cartilagem e do esqueleto e a sinalização do estroma, que influenciam microambientes inflamatórios e fibróticos. Alterações na expressão ou na função de Adamts9 têm sido associadas a anomalias do desenvolvimento e a fenótipos de doenças impulsionadas pela matriz, tornando-o um alvo útil para o estudo de redes de proteases extracelulares.

ADAMTS-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Adamts9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAMTS-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Adamts9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Adamts9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAMTS-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Adamts9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAMTS-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAMTS-9 em células tumorais com expressão de Adamts9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.