ADAM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418991

Panoramica

Adam5 codifica ADAM5, un membro della famiglia ADAM (a disintegrin and metalloproteinase) coinvolta nella proteolisi associata alla membrana e nelle interazioni cellula–cellula o cellula–matrice. Le proteine ADAM possono influenzare lo shedding dell’ectodominio delle proteine di superficie, modulando così le dinamiche di segnalazione, l’adesione e i processi di rimodellamento tissutale. Nei sistemi murini, ADAM5 è studiata nel contesto della regolazione, dipendente da proteasi, della biologia dello sviluppo e riproduttiva, con potenziali collegamenti a vie che governano la comunicazione cellulare e la percezione dell’ambiente extracellulare. La disregolazione delle attività di membri correlati della famiglia ADAM è associata a segnalazione infiammatoria e a fenotipi rilevanti per il cancro, rendendo Adam5 un bersaglio utile per studi meccanicistici delle reti di segnalazione guidate dalla proteolisi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adam5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adam5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adam5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adam5 per lo studio della segnalazione di ADAM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adam5 critici per la funzione di ADAM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adam5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADAM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adam5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAM5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADAM5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adam5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adam5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.