ACSL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403546-ACT

ACSL3 (membro 3 da família das acil-CoA sintetases de cadeia longa) catalisa a ativação, dependente de ATP, de ácidos graxos de cadeia longa em acil-CoAs, uma reação de entrada fundamental que direciona substratos lipídicos para a β-oxidação, a síntese de glicerolipídios e o remodelamento de fosfolipídios. Ao controlar a disponibilidade de pools de acil-CoA nas membranas intracelulares, a ACSL3 ajuda a coordenar a biogênese de gotículas lipídicas, a composição de membranas e a flexibilidade metabólica sob estresse nutricional. A atividade da ACSL3 está ligada a vias que regulam a homeostase lipídica e o metabolismo energético, e sua desregulação tem sido associada a programas lipogênicos alterados e a fenótipos de proliferação celular. Essas funções tornam a ACSL3 um alvo útil para dissecar como o uso de ácidos graxos se cruza com a dinâmica de organelas e redes de sinalização em modelos de células humanas.

ACSL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACSL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACSL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACSL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACSL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSL3 em células tumorais com expressão de ACSL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.