ACCα Double Nickase Plasmid (h): sc-401102-NIC

ACACA kodiert die Acetyl‑CoA‑Carboxylase alpha (ACCα), ein biotinabhängiges Enzym, das die ATP‑abhängige Umwandlung von Acetyl‑CoA zu Malonyl‑CoA katalysiert – den geschwindigkeitsbestimmenden, festgelegten Schritt der de‑novo‑Fettsäuresynthese. Durch die Kontrolle der Malonyl‑CoA‑Spiegel koordiniert ACCα den anabolen Lipidfluss und reguliert indirekt die mitochondriale Fettsäure‑β‑Oxidation über die Hemmung von CPT1; damit verknüpft es den Nährstoffstatus mit der Energiehomöostase. Die ACCα‑Aktivität ist in die AMPK‑Signalgebung und lipidsensitive transkriptionelle Programme eingebettet und prägt dadurch Membranbiogenese, die Bildung von Lipidtröpfchen sowie die Verteilung von Acetyl‑CoA auf verschiedene Stoffwechselwege. Eine fehlregulierte ACACA‑Expression oder ‑Aktivität wurde mit Phänotypen metabolischer Erkrankungen und lipidabhängigen Verwundbarkeiten im Stoffwechsel von Krebszellen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in Studien zur metabolischen Umprogrammierung und Lipogenese unterstützt.

ACCα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACACA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACACA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACACA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACACA-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.