Plásmido CRISPR de Activación (h) ACAD-10: sc-404351-ACT

ACAD10 codifica el miembro 10 de la familia de las acil‑CoA deshidrogenasas (ACAD‑10), una flavoproteína mitocondrial implicada en el catabolismo de ácidos grasos y aminoácidos y en una regulación más amplia del metabolismo oxidativo. Como parte de procesos vinculados a la β‑oxidación mitocondrial, ACAD‑10 contribuye a reacciones de deshidrogenación de acil‑CoA que influyen en la homeostasis energética, el equilibrio redox y la flexibilidad metabólica. Las alteraciones en la expresión o la actividad de ACAD10 se han asociado con vías de desregulación metabólica, incluidos fenotipos relacionados con la resistencia a la insulina y respuestas de estrés mitocondrial, lo que lo hace relevante para estudios de mecanismos de enfermedades metabólicas. Por ello, ACAD‑10 se investiga con frecuencia en contextos como el manejo de lípidos, la función mitocondrial y las redes de detección de nutrientes que se entrecruzan con la señalización inflamatoria y del estrés celular.

ACAD-10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACAD10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACAD-10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACAD10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACAD10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACAD-10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACAD10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACAD-10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACAD-10 en células tumorales con expresión de ACAD10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.