A20/TNFAIP3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400447-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das A20/TNFAIP3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- A20/TNFAIP3 Double-Nickase-Plasmid (h) und A20/TNFAIP3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TNFAIP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: A20/TNFAIP3: sc-166692
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
A20/TNFAIP3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400447-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
A20/TNFAIP3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400447-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human TNFAIP3 kodiert A20, ein ubiquitin-editierendes Enzym, das als zentraler negativer Regulator entzündlicher Signalwege wirkt. A20 beendet die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege downstream von Rezeptoren wie TNFR, IL‑1R und TLRs, indem es K63- und M1-verknüpfte Ubiquitinketten auf Signaladapterproteinen moduliert. Dadurch wird die Zytokinproduktion begrenzt und übermäßigen zellulären Stressreaktionen vorgebeugt. Über die Kontrolle von Kontrollpunkten der Apoptose und Nekroptose trägt A20 zur Aufrechterhaltung der Immunhomöostase und der Gewebeintegrität bei. Eine Fehlregulation oder Loss-of-Function-Variation in TNFAIP3 ist mit verstärkten entzündlichen Phänotypen verbunden und wurde u. a. im Kontext von Autoimmunität, chronischer Entzündung und Signalprozessen im Tumormikromilieu untersucht.
A20/TNFAIP3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TNFAIP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TNFAIP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TNFAIP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TNFAIP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.