Plasmide Double Nickase (h) γ-catenin: sc-401640-NIC

JUP code la γ-caténine humaine (plakoglobine), une protéine à répétitions armadillo qui relie les complexes d’adhérence des cadherines au cytosquelette d’actine et de filaments intermédiaires. Au niveau des jonctions d’adhérence et des desmosomes, la γ-caténine soutient l’adhérence cellule–cellule, l’intégrité tissulaire et la mécanotransduction, et elle peut également influencer des programmes transcriptionnels associés à la voie Wnt/β-caténine via des partenaires de liaison communs. Une expression altérée de JUP ou une localisation jonctionnelle anormale est associée à une perturbation de la fonction de barrière épithéliale ainsi qu’à des modifications de la migration et de la différenciation cellulaires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études en biologie du cancer et des phénotypes cardio-cutanés liés à un dysfonctionnement des desmosomes. Ces rôles placent la γ-caténine à l’interface de l’assemblage des jonctions, de l’organisation du cytosquelette et des réseaux de signalisation qui contrôlent l’homéostasie tissulaire.

γ-catenin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus JUP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de JUP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de JUP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de JUP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.