Plasmide CRISPR/Cas9 KO γ-catenin (m): sc-421210

Présentation

Jup code la γ-caténine (plakoglobine), une protéine de la famille des armadillo qui fonctionne au niveau des jonctions d’adhérence et des desmosomes pour relier les cadhérines au cytosquelette et stabiliser l’adhésion cellule–cellule. Dans les tissus murins, la γ-caténine soutient l’intégrité des tissus épithéliaux et cardiaques et participe au remodelage des jonctions au cours du développement et lors des réponses aux blessures. Elle peut également influencer des programmes transcriptionnels liés à la voie Wnt/β-caténine via des interactions avec les complexes TCF/LEF, reliant l’état d’adhérence à la régulation génique. Une γ-caténine dérégulée ou une architecture desmosomale altérée est associée à une fonction de barrière modifiée, à l’inflammation et à des phénotypes liés aux cardiomyopathies, faisant de Jup un nœud d’intérêt pour l’étude de la signalisation jonctionnelle et de l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γ-catenin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Jup dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Jup, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Jup à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γ-catenin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Jup pour l'étude de la signalisation de γ-catenin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Jup essentiels à la fonction de γ-catenin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Jup pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γ-catenin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γ-catenin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Jup. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γ-catenin plasmide HDR (m) et le γ-catenin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Jup pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Jup définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.