Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
βB3-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419827
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- βB3-crystallin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico βB3-crystallin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: βB3-crystallin Antibody (G-3): sc-374374
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
βB3-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419827 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Crybb3 codifica la βB3-cristallina, una proteina strutturale della famiglia delle β/γ-cristalline che contribuisce all’architettura delle cellule delle fibre del cristallino, all’ordine a lungo raggio e al mantenimento della trasparenza. La βB3-cristallina partecipa all’assemblaggio dei complessi di cristalline e sostiene la stabilità proteica e le proprietà refrattive durante lo sviluppo e la maturazione del cristallino. L’alterazione dell’omeostasi delle cristalline può favorire l’aggregazione proteica, modificare l’equilibrio redox e aumentare la diffusione della luce nel cristallino, collegando Crybb3 alle vie che regolano la proteostasi e le risposte allo stress cellulare nel cristallino. Nei modelli murini, le perturbazioni della composizione delle cristalline vengono comunemente studiate nel contesto della degenerazione del cristallino e di fenotipi simili alla cataratta.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO βB3-crystallin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crybb3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crybb3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crybb3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina βB3-crystallin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crybb3 per lo studio della segnalazione di βB3-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Crybb3 critici per la funzione di βB3-crystallin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crybb3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crybb3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal βB3-crystallin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR βB3-crystallin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crybb3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crybb3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.