α_1A-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401726

Übersicht

ADRA1A kodiert den menschlichen α1A-adrenergen Rezeptor (α1A-AR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der bevorzugt an Gq/11 koppelt, um die Phospholipase C zu aktivieren, den intrazellulären Ca2+-Spiegel zu erhöhen und PKC‑abhängige Signalwege zu stimulieren. Der α1A-AR reguliert die Kontraktion glatter Muskulatur, den Gefäßtonus und die Neurotransmission und kann nachgeschaltete MAPK/ERK‑Signalwege aktivieren, die zelluläre Proliferation und Transkriptionsprogramme beeinflussen. Die Rezeptoraktivität trägt zur adrenergen Kontrolle der kardiovaskulären und genitourinären Physiologie bei und moduliert in mehreren Geweben stressresponsive Signalnetzwerke. Fehlregulierte adrenerge Signalübertragung und eine veränderte ADRA1A‑Expression wurden u. a. im Zusammenhang mit Hypertonie, der Funktion der unteren Harnwege und Signalprozessen im Tumormikromilieu untersucht und bieten damit einen mechanistischen Ansatzpunkt für pathway‑orientierte Forschung.

Das α1A-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADRA1A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADRA1A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADRA1A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α1A-AR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADRA1A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α1A-AR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADRA1A-Exone abzielen, die für die α1A-AR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADRA1A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α1A-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom α1A-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADRA1A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α1A-AR HDR-Plasmid (h) und α1A-AR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADRA1A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADRA1A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.