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α1b TubulinCRISPR激活质粒(h) | sc-400021-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
α1b TubulinCRISPR激活质粒(h2) | sc-400021-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
TUBA1B 编码人源 α1b 微管蛋白(Tubulin),这是一种核心的 α-微管蛋白同种型,可与 β-微管蛋白形成异二聚体并构建微管,从而为细胞内运输、细胞极性建立以及有丝分裂纺锤体装配提供必需的结构支撑。微管的动态重塑在微管相关蛋白与微管蛋白翻译后修饰的协同调控下,主导囊泡运输、纤毛发生和染色体分离等过程。微管蛋白稳态的扰动会改变细胞骨架组织、细胞周期进程和应激反应,使微管蛋白生物学与增殖信号及细胞适应性相联系。作为一种广泛表达的细胞骨架成分,α1b 微管蛋白常用于研究微管动力学以及与细胞骨架依赖性表型相关的现象,这些现象与癌细胞行为和神经发育生物学密切相关。
α1b Tubulin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TUBA1B的表达。
α1b Tubulin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TUBA1B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TUBA1B转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性α1b Tubulin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TUBA1B位点,并能够研究内源性位点上依赖于α1b Tubulin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TUBA1B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟α1b Tubulin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。