ZO-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400196-NIC

TJP1 codifica la proteina di impalcatura delle tight junction ZO-1, un adattatore multi-dominio che collega claudine e occludina al citoscheletro corticale di actina per organizzare l'architettura di barriera epiteliale ed endoteliale. ZO-1 coordina l'assemblaggio delle giunzioni, la meccanotrasduzione e il rimodellamento del citoscheletro attraverso interazioni con complessi di segnalazione e di polarità, integrando processi quali l'adesione cellula–cellula, il controllo della permeabilità e la regolazione della crescita dipendente dal contatto. Alterazioni dell'espressione o della localizzazione di TJP1 sono associate alla disorganizzazione delle tight junction e a un trasporto paracellulare modificato, fenomeni frequentemente osservati durante infiammazione, fibrosi e disseminazione delle cellule tumorali. In quanto regolatore centrale della stabilità giunzionale, ZO-1 è ampiamente studiata nelle vie che governano l'integrità della barriera e la dinamica epitelio–mesenchimale.

ZO-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TJP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TJP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TJP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TJP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.