Plásmido CRISPR de Activación (h) WDR73: sc-405788-ACT

WDR73 codifica una proteína que contiene repeticiones WD implicada en procesos citoplasmáticos y nucleares que sostienen la homeostasis de tejidos proliferativos, con funciones descritas en la progresión del ciclo celular, la organización del citoesqueleto y el mantenimiento de la morfología celular. Los andamiajes de repeticiones WD suelen coordinar complejos multiproteicos, lo que sugiere que WDR73 contribuye a redes reguladas de señalización y tráfico intracelular que moldean el desarrollo de células neuronales y renales. La alteración genética de WDR73 se ha vinculado a anomalías del neurodesarrollo y a fenotipos de nefropatía, en consonancia con funciones en la maduración del cerebro y el riñón. En consecuencia, WDR73 es de interés para estudiar relaciones genotipo–fenotipo en modelos de enfermedad neurodeldesarrollo y renal, así como las vías que gobiernan la diferenciación y las respuestas al estrés celular.

WDR73 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WDR73 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WDR73 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WDR73 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WDR73, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WDR73. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WDR73 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WDR73 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WDR73 en células tumorales con expresión de WDR73 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.