WDPCP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405848

Descripción general

WDPCP (efector de polaridad celular planar con repeticiones WD) codifica una proteína asociada al centrosoma y al cilio, necesaria para la ciliogénesis primaria y para la organización relacionada con la polaridad celular planar. WDPCP favorece el anclaje del cuerpo basal y la formación del axonema, y contribuye al ensamblaje o la función de módulos de la zona de transición ciliar que coordinan el tráfico de componentes de señalización. A través de su papel en los cilios, WDPCP influye en vías dependientes de cilios como la señalización Hedgehog y en programas más amplios del citoesqueleto y de polaridad importantes para la arquitectura del tejido epitelial. La alteración de la función de WDPCP se asocia a fenotipos de ciliopatía, incluidas anomalías del desarrollo y defectos multisistémicos compatibles con una señalización ciliar y una morfogénesis alteradas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO WDPCP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WDPCP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WDPCP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WDPCP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WDPCP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WDPCP para la investigación de la señalización de WDPCP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WDPCP críticos para la función de WDPCP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WDPCP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido WDPCP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido WDPCP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WDPCP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WDPCP (h) y el plásmido HDR WDPCP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WDPCP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WDPCP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.