VDAC1/Porin Plasmide Double Nickase (h): sc-418200-NIC

VDAC1 (canale anionico voltaggio-dipendente 1), noto anche come porina, è un principale canale di passaggio nella membrana esterna mitocondriale che media lo scambio di ATP/ADP, ioni e metaboliti chiave tra mitocondri e citosol. Regolando la permeabilità della membrana esterna e coordinando le interazioni con l’esochinasi e con le proteine della famiglia BCL-2, VDAC1 integra il metabolismo energetico cellulare con la segnalazione apoptotica, l’omeostasi del calcio e l’equilibrio redox. La funzione di VDAC1 si interseca con la fosforilazione ossidativa, l’accoppiamento con la glicolisi e i processi delle membrane associate ai mitocondri, che modellano la dinamica mitocondriale e le risposte allo stress. Un’espressione o un’attività di canale di VDAC1 disregolate sono state associate ad alterazioni della bioenergetica e a disfunzione mitocondriale osservate nella ricerca su biologia del cancro, neurodegenerazione e malattie metaboliche.

VDAC1/Porin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VDAC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VDAC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VDAC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VDAC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.