Plásmido Doble Nickase (m) VAMP-2: sc-423650-NIC

Vamp2 codifica la proteína de membrana asociada a vesículas 2 (VAMP-2; sinaptobrevina-2), una v-SNARE central que se empareja con t-SNAREs como SNAP25 y las sintaxinas para impulsar la fusión de membranas durante la exocitosis regulada. En neuronas y células neuroendocrinas de ratón, VAMP-2 es esencial para el anclaje de las vesículas sinápticas y la liberación de neurotransmisores, y también contribuye a pasos del tráfico vesicular vinculados al reciclaje desde endosomas hacia la membrana plasmática. Mediante ciclos de ensamblaje y desensamblaje del complejo SNARE coordinados por NSF/α-SNAP, VAMP-2 ayuda a mantener la renovación presináptica de vesículas y la secreción acoplada al estímulo. Las alteraciones de la función de las SNARE y de la dinámica de fusión vesicular se estudian ampliamente en el contexto de mecanismos del neurodesarrollo y de la neurodegeneración, así como de fenotipos metabólicos que implican señalización dependiente de la secreción.

VAMP-2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Vamp2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Vamp2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Vamp2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Vamp2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.