UGT8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405110-ACT

UGT8 codifica la UDP-glicosiltransferasi 8, un enzima associato al Golgi che catalizza il trasferimento del galattosio da UDP-galattosio alla ceramide per generare galattosilceramide, un precursore chiave del solfatide e di altri glicosfingolipidi. Questa attività sostiene il metabolismo degli sfingolipidi e l’organizzazione dei microdomini di membrana, influenzando il traffico vescicolare, l’adesione cellulare e la trasduzione del segnale nella biologia neuronale e gliale. Le alterazioni della composizione dei glicosfingolipidi legate alla disregolazione di UGT8 sono state studiate in contesti demielinizzanti e neurodegenerativi, nonché nei fenotipi delle cellule tumorali, in cui il rimodellamento dei lipidi di membrana influisce su invasività e risposte allo stress. In quanto nodo di via nella glicosilazione lipidica, UGT8 è spesso oggetto di studio per il suo impatto sui profili lipidici associati alla mielina e sulle reti di segnalazione dipendenti dai glicosfingolipidi.

UGT8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UGT8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UGT8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UGT8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UGT8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UGT8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UGT8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UGT8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UGT8 nelle cellule tumorali con espressione di UGT8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.