UGT1A1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401190-LAC

UGT1A1 kodiert die UDP-Glucuronosyltransferase 1A1, ein mikrosomales Phase‑II‑Detoxifikationsenzym, das im endoplasmatischen Retikulum die Glucuronidierung von Bilirubin sowie vielfältigen endogenen und xenobiotischen Substraten katalysiert. Durch die Umwandlung lipophiler Verbindungen in besser wasserlösliche Glucuronide unterstützt UGT1A1 die hepatische Clearance und wirkt mit übergeordneten Arzneistoffwechselwegen zusammen, einschließlich der an Cytochrom P450 gekoppelten Biotransformation und des transporter-vermittelten Efflux. Unterschiede in der Expression oder Aktivität von UGT1A1 sind ein entscheidender Faktor für die Bilirubinhomöostase und für interindividuelle Unterschiede im Metabolismus von Arzneimitteln und Umweltchemikalien, mit hoher Relevanz für die Pharmakogenomik und die Leberfunktionsforschung. Eine Dysregulation der Glucuronidierungskapazität wird zudem im Kontext von metabolischem Stress und Mechanismen hepatobiliärer Erkrankungen untersucht.

UGT1A1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente UGT1A1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

UGT1A1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der UGT1A1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen UGT1A1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen UGT1A1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.