非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
泛素抗体 (P4G7): sc-53509. NIH/3T3 (A), Sol8 (B), KNRK (C), PC-12 (D), HeLa (E) 和 MCF7 (F) 全细胞裂解液中泛素表达的 Western 印迹分析.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423574
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Ubiquitin CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在Ubiquitin基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Ubiquitin: sc-166553，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423574 | 20 µg | $397.00 |
概述
Ubb 编码泛素（ubiquitin），这是一种高度保守的 76 个氨基酸修饰蛋白，可通过共价连接到靶蛋白上来调控其稳定性、亚细胞定位和信号传导。泛素化协同调节依赖蛋白酶体的降解、内吞作用以及 DNA 损伤应答，并通过泛素结合适配蛋白与自噬通路相互衔接，从而维持蛋白质稳态。在小鼠细胞中，依赖泛素的信号传导通过泛素链的拓扑结构及 E3 连接酶的特异性，广泛参与细胞周期推进、应激反应和免疫通路调控。泛素稳态与蛋白酶体通量的失衡常被用作神经退行性疾病、炎症以及与癌症相关的应激适应研究中的机制性读出指标，因此 Ubb 是进行通路解析的重要关键节点。
Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Ubb基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Ubb基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Ubb开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使Ubiquitin蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Ubb缺失的细胞模型，用于Ubiquitin信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 Ubiquitin 功能至关重要的 Ubb 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Ubb 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Ubb 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 Ubiquitin HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 Ubiquitin HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Ubb同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Ubb靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。