TXA2R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402468-ACT

TBXA2R codifica o receptor humano de tromboxano A2 (TXA2R), um receptor acoplado à proteína G que se liga ao tromboxano A2 para regular a ativação plaquetária, a contração do músculo liso vascular e a sinalização inflamatória. Após a ligação do ligante, o TXA2R acopla-se principalmente às vias Gq/11 e G12/13, promovendo a ativação da fosfolipase C, a mobilização de cálcio intracelular, a sinalização via RhoA e respostas subsequentes de MAPK que influenciam a alteração da forma celular, a secreção e a adesão. Esse receptor integra o metabolismo de eicosanoides com a hemostasia e a homeostase vascular, e é frequentemente estudado em contextos de biologia da trombose, vasorreatividade e microambientes inflamatórios. Alterações na sinalização do TXA2R têm sido associadas à disfunção da atividade plaquetária e a mecanismos de patologia vascular, reforçando sua relevância em modelos de pesquisa de doenças cardiometabólicas e associadas ao sistema imune.

TXA2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBXA2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TXA2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBXA2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBXA2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TXA2R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBXA2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TXA2R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TXA2R em células tumorais com expressão de TBXA2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.