Tropomyosin β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423482
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Tropomyosin β O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Tropomyosin β, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Tropomyosin β Anticorpo (3C8): sc-293374
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Tropomyosin β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423482 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Tpm2 codifica a tropomiosina β, uma proteína em hélice enrolada que se liga à actina e polimeriza ao longo da F-actina para estabilizar os filamentos finos e regular o acesso de motores de miosina e de fatores associados à actina. Em células musculares e não musculares, as isoformas de tropomiosina contribuem para a contratilidade, a tensão do citoesqueleto, a forma celular e a mecanotransdução ao ajustar a dinâmica dos filamentos de actina em fibras de estresse e em estruturas sarcoméricas. Por meio do seu papel na organização actomiosina, a TPM2 influencia processos como migração celular, remodelação de adesões e geração de força, que se conectam a vias do citoesqueleto dependentes de GTPases Rho. A desregulação da composição de tropomiosina e do controle dos filamentos de actina é relevante para distúrbios da estrutura e função muscular e para fenótipos impulsionados pelo citoesqueleto estudados em modelos de desenvolvimento e de doença.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin β (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tpm2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tpm2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tpm2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Tropomyosin β.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tpm2 para a investigação da sinalização de Tropomyosin β, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tpm2 críticos para a função Tropomyosin β
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tpm2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Tropomyosin β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Tropomyosin β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tpm2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Tropomyosin β Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Tropomyosin β (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tpm2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tpm2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.