Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin β (m): sc-423482

Présentation

Tpm2 code la tropomyosine β, une protéine hélicoïdale en coiled-coil se liant à l’actine, qui polymérise le long de la F‑actine afin de stabiliser les filaments fins et de réguler l’accès des moteurs de myosine et des facteurs associés à l’actine. Dans les cellules musculaires et non musculaires, les isoformes de tropomyosine contribuent à la contractilité, à la tension du cytosquelette, à la forme cellulaire et à la mécanotransduction en modulant la dynamique des filaments d’actine au sein des fibres de stress et des structures sarcomériques. Par son rôle dans l’organisation actomyosine, TPM2 influence des processus tels que la migration cellulaire, le remodelage des adhérences et la génération de forces, en interaction avec des voies cytosquelettiques dépendantes des GTPases Rho. La dérégulation de la composition en tropomyosine et du contrôle des filaments d’actine est pertinente pour les troubles de la structure et de la fonction musculaires, ainsi que pour des phénotypes pilotés par le cytosquelette étudiés dans des modèles de développement et de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tpm2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tpm2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tpm2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tropomyosin β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tpm2 pour l'étude de la signalisation de Tropomyosin β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tpm2 essentiels à la fonction de Tropomyosin β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tpm2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tropomyosin β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tropomyosin β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tpm2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tropomyosin β plasmide HDR (m) et le Tropomyosin β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tpm2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tpm2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.