TRAF6 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400117-LAC

TRAF6 (fator associado ao receptor de TNF 6) é uma ligase E3 de ubiquitina e uma proteína adaptadora que conecta receptores a montante à sinalização a jusante na imunidade inata e na inflamação. Ela medeia a poliubiquitinação ligada a K63 para ativar TAK1 e o complexo IKK, impulsionando as vias de NF-κB e MAPK (JNK/p38), e também se integra a respostas dependentes de IRF em contextos específicos. O TRAF6 atua a jusante de receptores Toll-like, de membros da família do receptor de IL-1 e de RANK, influenciando a produção de citocinas, a diferenciação de osteoclastos e programas de sobrevivência celular. A desregulação da sinalização de TRAF6 tem sido associada a estados inflamatórios crônicos, fenótipos autoimunes, defeitos de remodelação óssea e redes de sinalização oncogênica em múltiplos tipos tumorais.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRAF6 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TRAF6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRAF6 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TRAF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TRAF6. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TRAF6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.