Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404439
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Topo IIIα O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Topo IIIα, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404439 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
TOP3A codifica a topoisomerase IIIα do DNA humano, uma topoisomerase do tipo IA que resolve intermediários topológicos de DNA de fita simples durante a replicação, recombinação e reparo do DNA. A Topo IIIα atua no complexo BTRR com BLM, RMI1 e RMI2 para dissolver junções de Holliday duplas, suprimir eventos aberrantes de crossing-over e manter a estabilidade do genoma durante a recombinação homóloga. Ela também dá suporte à manutenção do DNA mitocondrial por meio da cooperação com fatores de replicação e reparo específicos da organela, ligando a TOP3A à integridade dos genomas nuclear e mitocondrial. A disrupção de vias associadas à TOP3A é relevante para fenótipos de instabilidade genômica e tem sido relacionada a distúrbios hereditários caracterizados por reparo defeituoso do DNA e sensibilidade ao estresse de replicação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Topo IIIα (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TOP3A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TOP3A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TOP3A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Topo IIIα.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TOP3A para a investigação da sinalização de Topo IIIα, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TOP3A críticos para a função Topo IIIα
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TOP3A para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TOP3A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Topo IIIα Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Topo IIIα (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TOP3A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TOP3A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.