TMB Substrate Buffer, 1X

O tampão do substrato TMB (3,3',5,5'-Tetrametilbenzidina), normalmente fornecido como uma solução 1X pronta a usar, é amplamente utilizado em ensaios bioquímicos, particularmente em ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA). O papel principal do TMB nestes ensaios é como substrato cromogénico para a enzima peroxidase de rábano (HRP), que é frequentemente conjugada a anticorpos nestes testes. O mecanismo de ação do TMB Tampão Substrato envolve a conversão enzimática do TMB pela HRP num produto colorido. Inicialmente, o TMB é incolor, mas após a oxidação pela HRP na presença de peróxido de hidrogénio (H₂O₂), transforma-se numa forma oxidada azul. A intensidade da cor azul produzida é diretamente proporcional à quantidade de enzima presente e, consequentemente, à quantidade do antigénio alvo no ensaio. Esta alteração colorimétrica é quantificável através de espetrofotometria, normalmente com um comprimento de onda de 650 nm para a forma azul. Para aumentar a sensibilidade, a reação pode ser interrompida com um ácido, como o ácido sulfúrico ou clorídrico, que muda a cor azul para amarelo, mensurável a 450 nm. Esta mudança não só amplifica o sinal como também o estabiliza, permitindo leituras mais exactas. Na investigação, o Tampão Substrato TMB é valorizado pela sua elevada sensibilidade e especificidade. Permite a deteção e quantificação de várias moléculas biológicas, incluindo hormonas, proteínas e anticorpos, tornando-o indispensável na investigação de diagnóstico, na análise quantitativa e qualitativa de biomarcadores e em várias outras aplicações em que é necessária uma medição precisa das interacções biológicas. A formulação pronta a usar do Tampão de Substrato 1X TMB simplifica a configuração do ensaio, garantindo consistência e fiabilidade em todas as experiências.