Plásmido Doble Nickase (h) TIMP-3: sc-401255-NIC

TIMP3 codifica el inhibidor tisular de metaloproteinasas 3 (TIMP-3), un inhibidor unido a la matriz extracelular de múltiples MMP y proteasas ADAM/ADAMTS que limita la proteólisis pericelular y estabiliza la arquitectura de la matriz. Al modular el desprendimiento (shedding) de receptores y ligandos de superficie, TIMP-3 influye en la señalización de EGFR y TNF, la migración celular, la angiogénesis y las respuestas inflamatorias dentro de los microambientes tisulares. Su actividad está estrechamente vinculada a programas de remodelación de la matriz extracelular que determinan la fibrosis, la homeostasis vascular y las interacciones entre el tumor y el estroma. Las alteraciones en la expresión o la función de TIMP3 se han asociado con un recambio desregulado de la matriz y con patologías como el remodelado cardiovascular, la inflamación crónica y la progresión del cáncer.

TIMP-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TIMP3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TIMP3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TIMP3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TIMP3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.