TEF-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423328

Panoramica

Tead3 codifica TEF-5, un fattore di trascrizione con dominio TEA/ATTS che interagisce con co-attivatori come YAP/TAZ per regolare programmi di espressione genica guidati da enhancer che controllano proliferazione cellulare, sopravvivenza e specificazione di linea. Nel topo, TEF-5 contribuisce al patterning dello sviluppo e alla crescita degli organi integrando i segnali della via Hippo con output trascrizionali dipendenti dal contesto. L’attività della famiglia TEAD è ampiamente collegata alla meccanotrasduzione e agli stati delle cellule staminali/progenitrici, rendendo Tead3 un nodo rilevante per lo studio del controllo della crescita e dell’omeostasi tissutale. Una disregolazione del circuito trascrizionale TEAD–YAP/TAZ è associata a fenotipi tumorigenici e a rigenerazione aberrante in molteplici sistemi modello, a supporto del suo impiego nella ricerca sulle vie di segnalazione e sui meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TEF-5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tead3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tead3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tead3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TEF-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tead3 per lo studio della segnalazione di TEF-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tead3 critici per la funzione di TEF-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tead3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TEF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TEF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tead3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TEF-5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TEF-5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tead3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tead3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.