Plásmido CRISPR de Activación (h) TBX20: sc-404350-ACT

TBX20 codifica un factor de transcripción tipo T-box que desempeña un papel central en la especificación del linaje cardíaco y la maduración de las cámaras al coordinar redes reguladoras de genes en el miocardio en desarrollo y en el adulto. TBX20 se integra con programas cardiogénicos fundamentales que involucran a NKX2-5, GATA4 y factores de la familia MEF2 para modular los resultados transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación y las propiedades de conducción eléctrica de los cardiomiocitos. A través de estos circuitos transcripcionales, TBX20 influye en vías que regulan la organización del sarcómero, la remodelación de la matriz extracelular y la morfogénesis cardíaca. La alteración de la expresión o la función de TBX20 se ha vinculado con defectos cardíacos congénitos y cardiomiopatías, lo que lo convierte en un nodo útil para modelar la desregulación transcripcional en la biología cardiovascular.

TBX20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBX20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TBX20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBX20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBX20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TBX20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBX20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TBX20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TBX20 en células tumorales con expresión de TBX20 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.