TBX18 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401564-ACT

TBX18 codifica um fator de transcrição da família T-box que orienta o padrão embrionário e a organogênese ao regular programas de especificação de linhagens e de diferenciação mesenquimal. No desenvolvimento humano, o TBX18 está fortemente associado à morfogênese urogenital e musculoesquelética e contribui para a formação do sistema de condução cardíaco por meio do controle transcricional de redes gênicas do desenvolvimento. Sua atividade se cruza com processos de sinalização que moldam limites teciduais e decisões de destino celular, incluindo vias influenciadas por sinais de WNT, BMP e FGF. A expressão ou função desregulada de TBX18 tem sido associada a anomalias congênitas do desenvolvimento, tornando-o um ponto útil para estudar a circuitaria transcricional subjacente ao desenvolvimento de órgãos e a fenótipos relevantes para doenças.

TBX18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBX18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBX18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBX18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBX18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBX18. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBX18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBX18 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBX18 em células tumorais com expressão de TBX18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.