Plásmido CRISPR de Activación (h) TBX15: sc-405994-ACT

El gen humano **TBX15** codifica un factor de transcripción de la familia T-box que regula programas de patrón del desarrollo y la especificación de linajes mesenquimales, con funciones destacadas en la biología del tejido esquelético y adiposo. Al unirse a motivos T-box y coordinar redes transcripcionales, TBX15 influye en el estado de la cromatina y en los programas de expresión génica posteriores que determinan decisiones de destino celular, diferenciación y morfogénesis tisular. Las alteraciones en la expresión de TBX15 y las variantes reguladoras se han asociado con la distribución del tejido adiposo y fenotipos metabólicos, y la actividad desregulada de TBX15 se estudia en contextos que incluyen anomalías del desarrollo y reprogramación transcripcional relacionada con el cáncer. Estas características hacen de TBX15 un nodo útil para analizar el control transcripcional del compromiso de linaje y la regulación génica específica de tejido.

TBX15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBX15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TBX15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBX15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBX15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TBX15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBX15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TBX15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TBX15 en células tumorales con expresión de TBX15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.