TBL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411490-ACT

TBL3 (transducina beta-like 3) codifica uma proteína conservada com repetições WD que se localiza predominantemente no nucléolo e dá suporte à biogênese de ribossomos, incluindo o processamento do pré-rRNA e a maturação da subunidade ribossômica pequena. Ao coordenar etapas de montagem e de controle de qualidade em complexos nucleolares de RNA–proteína, TBL3 influencia a capacidade translacional global e programas de crescimento celular. A perturbação da função nucleolar e do processamento de rRNA é uma característica comum de estados de estresse proliferativo, tornando TBL3 um ponto útil para estudar como a produção de ribossomos se relaciona com o controle do ciclo celular e a proteostase. Padrões alterados de expressão ou de dependência de fatores de biogênese ribossomal, incluindo TBL3, foram observados no câncer e em outros distúrbios caracterizados por síntese proteica desregulada.

TBL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBL3 em células tumorais com expressão de TBL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.