TAL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423262-ACT

O gene Tal2 de camundongo codifica o fator de transcrição TAL2 do tipo basic helix-loop-helix (bHLH), um regulador que se liga ao DNA e influencia a especificação de linhagem e programas de diferenciação por meio de redes transcricionais. A atividade de TAL2 se cruza com circuitos centrais de regulação gênica do desenvolvimento, nos quais fatores bHLH coordenam a acessibilidade da cromatina e transições de estado celular. Em contextos hematopoiéticos e neurais, a expressão desregulada de TAL2 tem sido associada a controle transcricional aberrante e a assinaturas de expressão gênica oncogênicas, sustentando seu uso como um ponto de entrada mecanístico para estudar vias associadas à transformação. Como fator de transcrição nuclear, TAL2 fornece um modelo manejável para investigar reguladores a montante, alvos a jusante e o remodelamento de redes gênicas dependente do contexto.

TAL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tal2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tal2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tal2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tal2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAL2 em células tumorais com expressão de Tal2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.