Partículas Lentivirales de Activación (h) SVEP1: sc-413315-LAC

SVEP1 (que contiene dominios sushi, tipo A del factor von Willebrand, EGF y pentraxina 1) codifica una gran proteína asociada a la matriz extracelular que favorece la adhesión célula–célula y célula–matriz y contribuye a la organización tisular. SVEP1 activa la señalización dependiente de integrinas y se ha vinculado con la regulación de la remodelación vascular y linfática, el reclutamiento de células inflamatorias y las interacciones estroma–epitelio que dan forma a programas de desarrollo y reparación. La expresión alterada de SVEP1 se ha asociado con rasgos cardiometabólicos y vasculares, remodelación fibrótica y características del microambiente tumoral, lo que la convierte en una diana útil para desentrañar redes de señalización impulsadas por la matriz extracelular. Los estudios funcionales suelen examinar SVEP1 en contextos endoteliales y mesenquimales para comprender cómo las señales de la matriz modulan la migración, la diferenciación y el diálogo cruzado entre el sistema inmune y el estroma.

Las partículas de activación lentiviral SVEP1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SVEP1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SVEP1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SVEP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SVEP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SVEP1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.