SURF-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423221

Descripción general

Surf4 codifica SURF-4, un receptor de carga de membrana del retículo endoplásmico (RE) que participa en la exportación selectiva de proteínas secretoras desde el RE hacia el aparato de Golgi mediante tráfico dependiente de COPII. SURF-4 contribuye a la proteostasis al regular la retención en el RE frente al transporte anterógrado, influyendo así en la eficiencia de secreción y en la respuesta celular a proteínas mal plegadas. En sistemas murinos, la función de Surf4 se cruza con vías que controlan el manejo de lípidos, la abundancia de proteínas extracelulares y la señalización del estrés del RE, lo que la hace relevante para estudios de regulación metabólica y de la homeostasis de la vía secretora. La perturbación del tráfico mediado por SURF-4 se utiliza para modelar mecanismos que vinculan defectos de secreción con disfunción celular y fenotipos asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SURF-4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Surf4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Surf4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Surf4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SURF-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Surf4 para la investigación de la señalización de SURF-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Surf4 críticos para la función de SURF-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Surf4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SURF-4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SURF-4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Surf4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SURF-4 (m) y el plásmido HDR SURF-4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Surf4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Surf4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.