Plásmido CRISPR de Activación (h) SPTLC1: sc-402829-ACT

SPTLC1 codifica una subunidad catalítica de la serina palmitoiltransferasa, la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis *de novo* de esfingolípidos, que condensa serina con palmitoil‑CoA para generar 3‑cetoesfinganina. Al controlar la producción de ceramida, esfingomielina y glicoesfingolípidos complejos, SPTLC1 influye en la composición de la membrana, la señalización en balsas lipídicas, la autofagia y las vías de respuesta al estrés, incluida la homeostasis del retículo endoplásmico. La alteración de la actividad de SPTLC1 perturba los perfiles de esfingolípidos y se ha asociado con fenotipos de neurodegeneración y neuropatía periférica, así como con una desregulación metabólica más amplia. Como nodo central del metabolismo lipídico, SPTLC1 se estudia ampliamente por su impacto en la señalización celular, la función de los orgánulos y los procesos inflamatorios impulsados por lípidos.

SPTLC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPTLC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SPTLC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPTLC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPTLC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SPTLC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPTLC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SPTLC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SPTLC1 en células tumorales con expresión de SPTLC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.