Sox-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401217-ACT

SOX4 codifica o fator de transcrição Sox-4, uma proteína de ligação ao DNA do tipo high-mobility group (HMG) box que regula a especificação de linhagens, as decisões de destino celular e programas de desenvolvimento em múltiplos tecidos. Sox-4 integra-se a redes de sinalização como Wnt/β-catenina, TGF-β/SMAD e Notch para controlar circuitos transcricionais que governam proliferação, diferenciação e sobrevivência. A expressão desregulada de SOX4 foi relatada em diversos contextos tumorais e é frequentemente estudada em relação à transição epitélio–mesênquima, a estados celulares semelhantes a células-tronco e à expressão de genes associados à invasão. Em sistemas imunes e no neurodesenvolvimento, Sox-4 também contribui para trajetórias de diferenciação, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de regulação transcricional e plasticidade celular.

Sox-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox-4 em células tumorais com expressão de SOX4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.