Sox-17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401192-ACT

SOX17 codifica o fator de transcrição Sox-17, uma proteína de ligação ao DNA do tipo grupo de alta mobilidade (HMG) que desempenha papéis essenciais na especificação do endoderma definitivo, no estabelecimento de padrões embrionários e no comprometimento de linhagens celulares. Em células humanas, Sox-17 integra-se a programas transcricionais associados às vias WNT/β-catenina, TGF-β/SMAD e Notch para regular genes que controlam a diferenciação, a organização epitelial e o timing do desenvolvimento. A alteração da expressão de SOX17 ou a desregulação de seus mecanismos regulatórios tem sido associada a defeitos em tecidos derivados do endoderma e a fenótipos relevantes para o câncer, incluindo mudanças na proliferação, migração e estabilidade do estado celular. Como regulador do desenvolvimento, SOX17 é frequentemente utilizado como marcador e como indutor funcional em estudos de diferenciação de células-tronco e de mapeamento de destino celular.

Sox-17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox-17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox-17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox-17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox-17 em células tumorais com expressão de SOX17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.