Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMYD3: sc-402128-ACT

SMYD3 (protéine 3 contenant les domaines SET et MYND) est une méthyltransférase de la lysine qui catalyse la méthylation de l’histone H3, principalement en H3K4, afin de favoriser l’activation transcriptionnelle de programmes géniques cibles. Par le remodelage de la chromatine et la régulation de la transcription à proximité des promoteurs, SMYD3 influence des processus fondamentaux, notamment la progression du cycle cellulaire, la réponse aux dommages de l’ADN et la différenciation. SMYD3 méthyle également certains substrats non histoniques, reliant le contrôle épigénétique aux voies de signalisation et à la dynamique du cytosquelette. Une expression et une activité dérégulées de SMYD3 ont été associées à des réseaux transcriptionnels oncogéniques et à des phénotypes prolifératifs altérés, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation épigénétique dans les cellules humaines.

SMYD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMYD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMYD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMYD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMYD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMYD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMYD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMYD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMYD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMYD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.