SFRS2B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401973-ACT

SRSF8は、セリン／アルギニンに富むスプライシング因子SFRS2Bをコードしており、スプライソソームの組み立てに関与し、pre-mRNAの選択的スプライシングの決定を制御するRNA結合タンパク質です。SFRS2Bは、エクソン性スプライシングエンハンサーを認識し、エクソンの取り込みまたはスキップを調整することで、mRNAアイソフォームの多様性、転写産物の安定性、ならびに下流のプロテオーム構成に影響を与えます。スプライシング因子の活性は、転写伸長、mRNAプロセシング、ストレス応答性のRNA代謝と交差し、増殖や分化といった細胞状態のプログラム形成に関与します。代替スプライシングの破綻およびSRファミリー調節因子の発現変化はヒト疾患の生物学において繰り返し見られる特徴であり、腫瘍学的および神経生物学的文脈におけるSRSF8依存的なアイソフォームネットワークの解析が支持されます。

SFRS2B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SRSF8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SFRS2B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SRSF8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSRSF8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SFRS2Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSRSF8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSFRS2B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSRSF8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSFRS2B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。