Set1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431532

概要

Setd1b は、Set1B ヒストンリジンメチルトランスフェラーゼをコードしており、活性化プロモーターおよび制御エレメントでの H3K4 メチル化を触媒する COMPASS 様クロマチン修飾複合体の中核構成要素である。H3K4me1/2/3 の状態を調節することにより、Set1B は転写開始、RNA ポリメラーゼ II の活性、ならびに細胞アイデンティティ・プログラムのエピジェネティックな維持の協調に寄与する。Setd1b 依存的なクロマチン制御は、発生および神経系の遺伝子発現ネットワークと関連しており、SETD1B 機能の変化は神経発達表現型や、疾患生物学に関わるより広範なエピジェネティック制御異常と結び付けられている。マウス系では、Set1B はプロモーター関連ヒストンメチル化がシグナル応答性の転写やゲノム全体のクロマチン景観をどのように形成するかを解明するための、扱いやすい標的となる。

Set1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSetd1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Setd1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Setd1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Set1Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Set1Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Setd1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Set1Bの機能に不可欠なSetd1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Setd1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Set1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSet1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Setd1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Set1B HDRプラスミド（m）および Set1B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSetd1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSetd1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。