Serglycin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422394

Panoramica

Srgn codifica la serglicina, un proteoglicano arricchito nelle cellule ematopoietiche che funge da impalcatura per l’impacchettamento e l’immagazzinamento di proteasi, chemochine e altri mediatori bioattivi all’interno dei granuli secretori. Nelle cellule immunitarie murine, la serglicina contribuisce alla biogenesi dei granuli, all’esocitosi regolata e alle interazioni con la matrice extracellulare attraverso la sua proteina core modificata con solfato di condroitina. Queste funzioni collegano Srgn a vie che controllano le risposte effettrici dell’immunità innata e adattativa, la segnalazione infiammatoria e il rimodellamento dipendente da proteasi. Alterazioni nella biologia della serglicina sono state implicate in un’attivazione immunitaria deregolata e in processi del microambiente associati ai tumori, a sostegno della sua rilevanza negli studi meccanicistici sull’infiammazione e sulla biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Serglycin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Srgn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Srgn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Srgn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Serglycin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Srgn per lo studio della segnalazione di Serglycin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Srgn critici per la funzione di Serglycin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Srgn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Serglycin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Serglycin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Srgn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Serglycin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Serglycin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Srgn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Srgn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.