Partículas Lentivirales de Activación (h) SAP 18: sc-404214-LAC

SAP18 (SAP 18) codifica un componente central de la maquinaria de represión transcripcional que interactúa con la desacetilación de histonas y la remodelación de la cromatina para modular programas de expresión génica. SAP18 se asocia con el complejo Sin3/HDAC y contribuye al control epigenético de la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la transcripción sensible al estrés. A través de estas interacciones, SAP18 ayuda a coordinar vías que regulan el procesamiento de ARN y las salidas transcripcionales vinculadas a la estabilidad del genoma. La represión dependiente de SAP18 cuando se encuentra desregulada se ha investigado en el contexto de estados aberrantes de la cromatina relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos que implican una regulación epigenética alterada.

Las partículas de activación lentiviral SAP 18 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SAP18 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SAP 18 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SAP18, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SAP 18. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SAP18 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.