RXRα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400342-ACT

O recetor X de retinoides alfa (RXRA; RXRα) é um recetor nuclear ativado por ligando que funciona como um parceiro central de dimerização para múltiplos fatores de transcrição, incluindo PPARs, LXRs, FXR, VDR e RARs, regulando programas génicos que controlam o metabolismo de lípidos e glicose, a sinalização de ácidos biliares, a inflamação e a diferenciação celular. O RXRα modula a transcrição dependente da cromatina através do recrutamento de coativadores e correpressores, integrando sinais de retinoides e metabólicos entre tecidos. A atividade desregulada de RXRA ou redes de sinalização de RXRα alteradas têm sido associadas a disfunção metabólica, respostas imunitárias aberrantes e efeitos dependentes do contexto sobre a proliferação e a diferenciação na biologia do cancro. Como eixo central de transcrição, o RXRA é amplamente utilizado para investigar a comunicação cruzada entre recetores nucleares e a circuitaria transcricional em hepatócitos, adipócitos, macrófagos e modelos de células tumorais.

RXRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RXRA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RXRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RXRA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RXRA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RXRα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RXRA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RXRα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RXRα em células tumorais com expressão de RXRA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.