RUNX1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419483-ACT

Runx1 codifica il fattore di trascrizione correlato a Runt RUNX1, un regolatore chiave dell’ematopoiesi definitiva che controlla l’impegno di linea e la maturazione delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche. RUNX1 opera in reti trascrizionali con cofattori quali CBFβ e integra input di segnalazione per coordinare l’accessibilità della cromatina, l’attività degli enhancer e i programmi del ciclo cellulare durante la differenziazione mieloide e linfoide. Nei modelli murini, alterazioni del dosaggio o dell’attività di Runx1 perturbano lo sviluppo del sangue, influenzano l’omeostasi delle cellule immunitarie e forniscono collegamenti meccanicistici con la leucemogenesi e con fenotipi di insufficienza del midollo osseo. Questo gene è spesso studiato in vie che governano l’autorinnovamento delle cellule staminali, i checkpoint di differenziazione e la disregolazione trascrizionale oncogenica.

RUNX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Runx1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RUNX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Runx1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Runx1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RUNX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Runx1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RUNX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RUNX1 nelle cellule tumorali con espressione di Runx1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.