RNF126 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405024-ACT

RNF126 codifica uma ligase de ubiquitina E3 que ajuda a regular a homeostase proteica ao catalisar a transferência de ubiquitina para substratos específicos, influenciando sua estabilidade, localização e degradação. Por meio do controle dependente de ubiquitina de reguladores de sinalização e do ciclo celular, RNF126 contribui para vias que governam a proliferação, as respostas a danos no DNA e programas de transcrição que moldam decisões de destino celular. Redes de ubiquitinação desreguladas envolvendo RNF126 têm sido associadas a alterações no controle de crescimento e na adaptação ao estresse em contextos relevantes para o câncer, tornando-a um alvo útil para investigar a sinalização impulsionada pela proteostase. A modulação experimental de RNF126 dá suporte a estudos mecanísticos da atividade de ligases de ubiquitina, do reconhecimento de substratos e do cross-talk entre vias em modelos de células humanas.

RNF126 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RNF126 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RNF126 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RNF126 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RNF126, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RNF126. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RNF126 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RNF126 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RNF126 em células tumorais com expressão de RNF126 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.