RIP140 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435290

Panoramica

Il gene Nrip1 del topo codifica RIP140 (NRIP1), un coregolatore dei recettori nucleari dipendente dal ligando che agisce prevalentemente come corepressore trascrizionale reclutando complessi di modifica della cromatina, come assemblaggi contenenti HDAC. RIP140 integra i segnali provenienti da recettori nucleari tra cui PPAR, ER, TR e RXR per modulare programmi genici che controllano la funzione mitocondriale, il metabolismo ossidativo, la differenziazione degli adipociti e gli output trascrizionali infiammatori. Attraverso queste vie, Nrip1 è ampiamente utilizzato per studiare l’omeostasi metabolica, il dispendio energetico e le risposte infiammatorie mediate dai macrofagi. Una deregolazione del controllo trascrizionale dipendente da RIP140 è stata associata, in contesti di ricerca preclinica, a fenotipi rilevanti per obesità, insulino-resistenza, biologia del fegato grasso e modelli tumorali sensibili agli ormoni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP140 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nrip1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nrip1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nrip1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RIP140.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nrip1 per lo studio della segnalazione di RIP140, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nrip1 critici per la funzione di RIP140
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nrip1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RIP140 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RIP140 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nrip1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RIP140 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RIP140 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nrip1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nrip1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.