RFC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422982

概要

Slc19a1は、還元型葉酸および関連する1炭素代謝物の細胞内取り込みを担う主要な形質膜トランスポーターである還元型葉酸キャリアRFC-1をコードしています。RFC-1は細胞内の葉酸利用可能性を制御することで、ヌクレオチド生合成、メチル化反応、酸化還元恒常性を支え、DNA複製やエピジェネティック制御といった中核的プロセスと結びついています。Slc19a1の活性が変化すると、葉酸依存的な代謝フラックスが変動し、哺乳類細胞における増殖能、ゲノム安定性、分化プログラムに影響を及ぼし得ます。マウスモデルでは、RFC-1の機能は葉酸代謝、発生生物学、ならびに葉酸感受性表現型の基盤となる機構の文脈でしばしば検討されます。

RFC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc19a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc19a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc19a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RFC-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RFC-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc19a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RFC-1の機能に不可欠なSlc19a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc19a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RFC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRFC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc19a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RFC-1 HDRプラスミド（m）および RFC-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc19a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc19a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。