Ras-GRF2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404141

Panoramica

RASGRF2 codifica Ras-GRF2, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina regolato da calcio e fosfolipidi che attiva Ras e piccole GTPasi correlate per controllare la dinamica della segnalazione MAPK/ERK. Ras-GRF2 integra input provenienti dall’attività neuronale e dalla segnalazione mediata da recettori, influenzando la plasticità sinaptica, la crescita dei neuriti e il rimodellamento del citoscheletro attraverso chinasi a valle e vie della famiglia Rho. Modulando programmi trascrizionali dipendenti da Ras, RASGRF2 incide sugli stati di proliferazione e differenziazione cellulare in modo dipendente dal contesto. Un’accoppiata regolazione alterata della via di Ras che coinvolge Ras-GRF2 è stata studiata in modelli di neurobiologia e di segnalazione legata al cancro, in cui l’attivazione aberrante delle GTPasi può rimodellare le risposte di crescita e sopravvivenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RASGRF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RASGRF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RASGRF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ras-GRF2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RASGRF2 per lo studio della segnalazione di Ras-GRF2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RASGRF2 critici per la funzione di Ras-GRF2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RASGRF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RASGRF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ras-GRF2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ras-GRF2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RASGRF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RASGRF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.